Optimasi Amplifikasi DNA Menggunakan Metode Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk Karakterisasi Gen Light Chain (LC) Trastuzumab dalam Sel Chinese Hamster Ovary (CHO)

Abstract

Telah dilakukan pengujian optimasi amplifikasi DNA menggunakan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk karakterisasi gen light chain (LC) trastuzumab dalam sel Chinese Hamster Ovary (CHO) di laboratorium matriks riset PT. Bio Farma Persero Bandung. Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui sepasang primer yang sudah ditentukan dapat menempel secara sempurna atau tidak pada cetakan DNA gen light chain berdasarkan optimasi suhu annealing yang divariasikan. Adapun tahapan-tahapan pengujian yang dilakukan adalah melakukan isolasi DNA dalam sampel sel CHO menggunakan metode Wizard Genomic Purification Kit, menentukan optimasi suhu annealing (penempelan) menggunakan metode Polymerase Chain Reaction (PCR) dan menentukan hasil optimasi suhu annealing menggunakan metode elektroforesis gel agarosa. Konsentrasi setiap sampel hasil isolasi DNA dalam sel CHO menggunakan metode Wizard Genomic Purification Kit diperoleh sebesar 228,00; 262,32 dan 315,47 ng/μL dengan kemurnian diperoleh sebesar 1,891; 1,915 dan 1,937. Optimasi suhu annealing pertama menggunakan variasi suhu 61,0; 62,5; 64,0; 65,5; 67,0 dan 68,5 oC dan optimasi suhu annealing kedua menggunakan suhu 62,5 oC yang merupakan suhu optimum. Ukuran pita DNA gen light chain diperoleh sebesar 1063 bp (base pair/pasangan basa).